MTT细胞增殖检测试剂盒

阅读次数：15790 发布时间：2020/7/27 16:19:02

MTT细胞增殖检测试剂盒

MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

产品简介：
MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan，在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解，然后通过酶标仪可以测定490nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

使用说明：
1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔180μL，3000-10000个细胞/孔。
2.置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁，培养6-24小时。
3.加入适当浓度的受试化合物，继续培养适当时间。
4.小心吸去上清，加入90μL新鲜培养液，再加入10μL MTT溶液，继续培养4 h。
5.然后吸掉上清，每孔加入110μL Formazan溶解液，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光值。
6.同时设置调零孔（培养基、MTT、 Formazan溶解液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、 Formazan溶解液），每组设定3复孔。

注意事项：
1.由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈*容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
2.MTT溶液为黄色需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。