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培养基 EMEM完-全培养基:90%EMEM+10%FBS
传代方法 复苏步骤:①冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速没入37℃水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以1min内全部溶解为宜;②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完-全培养基的离心管内,1000-1200rpm离心5min,弃去上清液,用1-2mL完-全培养基重悬细胞。③将细胞悬液加入到含有5-6mL完-全培养基的T25瓶中,放入培养箱培养。
细胞传代:①将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);②镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处,肉眼可见细胞层脱落,即消化完成,否则继续消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL完-全培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。③将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加适当的完-全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。;④注意培养基pH值变化和细胞密度,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%-90%时,重复传代操作或者冻存。
生长条件 培养温度37℃;气体环境5%CO2+95%空气;
生长特性 贴壁生长
存储条件 液氮
安全等级 1
形态 上皮细胞样,多角形,不规则形,边缘不规则,单层贴壁生长,背景干净
植物细胞的原生质层相当于一层半透膜。当细胞液浓度小于外界浓度时,细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中,使细胞壁和原生质层都出现一定程度的收缩。由于原生质层比细胞壁的伸缩性大,当细胞不断失水时,原生质层与细胞壁分离,也就是发生了质壁分离。当细胞液浓度大于外界溶液浓度时,外界溶液中的水分透过原生质层进入细胞液中使原生质层复原,逐渐发生质壁分离的复原。 细胞质不是凝固静止的,而是缓缓地运动着的。在只具有一个中央液泡的细胞内,细胞质往往围绕液泡循环流动,这样便促进了细胞内物质的转运,也加强了细胞器之间的相互联系。细胞质运动是一种消耗能量的生命现象。细胞的生命活动越旺盛,细胞质流动越快,反之,则越慢。细胞死亡后,其细胞质的流动也就停止了。
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