Polybrene /聚凝胺使用操作说明

阅读次数：16807 发布时间：2023/8/9 14:40:12

Polybrene /聚凝胺 使用操作说明

产品名称：Polybrene (Hexadimethrine Bromide)

中文名称：聚凝胺

CAS号：28728-55-4

分子量：544.43

纯度：≥94%

浓度：10mg/ml

Polybrene(聚凝胺)是一类高价离子季铵盐多聚物.溶解后带正电.与细胞表面的阴离子结合,能显著提高逆转录病毒对细胞的感染效率。一般能是高感染效率2～10倍。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒介导的哺乳动物细胞转染。但Polybrene对某些细胞也是存在毒性的,因此.使用之前要先对细胞进行测试。

聚凝胺又名Hexadime thrine Bromide .中文名海(地)美溴钹,是海(地)美溴铵( Hexadimethrine Bromide )液体制品的商标名.是种非常有效的基因转染增强剂。用于病毒介导细胞转染常用浓度为8μg/ml .具体浓度依细胞类型会有差异.可参阅文献或梯度实验摸索。Polybrene用于转染增强剂，已经成为全球各大实验室和各种基因转染服务机构*通用的方法 , 相比于硫酸鱼精蛋白( Protamine sulfate , CAS : 98001-69-5 )和其他阳离子的使用普遍率更高更广泛。

使用说明：

实验1:逆转录病毒感染( Retroviral Infection)

(1)重组逆转录病毒原液的制备:取5ml生长培养基(5%血清)加入约含单层转染逆转录包装细胞的100mm培养盘内。孵育24h后，吸去培养液并用0.45um滤器过滤。

(2)待感染细胞的培养:100mm培养盘内加入10ml培养基，细胞密度为5x105/盘。

(3)病毒感染:细胞培养24h后，吸去培养液。用含polybrene的2m|病毒上清( 或将病毒原液稀释到2ml)感染细胞，polybrene的终浓度为5 Hg-10 u g/ml。37℃孵育3-6h。

(4) 收集病毒颗粒:加入8ml培养基。感染3天后，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。

实验2:转染

(1)生长培养基培养细胞培养细胞密度约50%;

(2)孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基Polybrene混合液，按如下操作制备混合液:①添加培养基(60mm培养M2ml，100mm培养皿3ml )

37℃预热;②添加10ng～10μg质粒轻轻混匀;③加入Polybrene至终浓度为5ug-10 H.g/mlo轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。

(3)去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基Polybrene溶液，在37° C孵育细胞620h。细胞培养的6h内约每1.5h轻柔混匀。

(4)去除DNA-培养基Polybrene溶液。用DMSO shock solution (15%DMSO in 1X HBSS )轻轻盖住细胞(60mm培养