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细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒检测原理

阅读次数 :15485    发布时间 :2023/8/23 15:14:53

 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒检测原理

 

细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程 ,主要分为细胞分裂间期与有丝分裂期(M期)两个阶段;细胞间期主要由DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)组成,整个细胞周期变化顺序可用G1→S→G2→M来表示。首先G1时期:细胞主要合成RNA和蛋白质等物质,为细胞进入S期做好物质和能量的准备;随后进入S期:细胞开始进行DNA和一些组蛋白等物质合成,细胞DNA含量开始增加;到G2期:这时细胞DNA含量已经变成了G1时期的2倍 ,并已经停止了DNA的复制,为进入有丝分裂期做大量的蛋白质等物质的合成;如果G0(细胞暂时停止分裂和分化期 、静止期)/G1期,细胞中DNA含量为1N;那么处于G2期的细胞中DNA含量为2N;而处于G1和G2时期之间的S期细胞,DNA含量在1N~2N之间;而凋亡的细胞 ,细胞核会发生浓缩和DN段化,导致部分基因组DN段丢失,所以其DNA含量是小于1N的,在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰 ,即凋亡细胞峰 。因此,可根据细胞DNA的含量来判断细胞所处的周期和状态。

细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。细胞发生凋亡时 ,由于胞浆和染色质浓缩 、核碎裂 ,产生凋亡小体 ,使细胞的光散射性质发生变化 。凋亡前期,染色质皱缩 ,细胞密度增加 ,前向角光散射色显著降低 ;凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光散色均显著降低。

细胞周期与凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)采用了经典的碘化丙啶染色(Propidium staining)方法对细胞周期与凋亡进行检测分析 。利用碘化丙啶能够嵌入双链DNA中 ,并使其产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比的特性;结合细胞不同周期中,DNA含量的规则变化,可以区分细胞处于的周期和状态。本试剂盒可用于组织细胞 、贴壁或悬浮细胞的细胞周期与凋亡检测(如用于组织的细胞周期与凋亡检测 ,则须把组织消化成单细胞状态,才可进行检测)。

 

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