鼠尾胶原蛋白I型使用原理
鼠尾胶原蛋白 I 型(rattailtendon collagen type I)是通过 Birkedal-Hansen 的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。本公司鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿 ，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。
1 ，在使用鼠胶原蛋白 I 型包被的细胞培养皿中检查到 PC-12 细胞的贴壁和生长 。
2，在 1mg/ml 浓度以上 ，pH 为 7 左右时可形成具有一定强度的三维胶，检查到 NIH-3T3 细胞在三维胶内正常生长、PC-12 细胞在三维胶表面正常生长。
使用方法 ：
1、细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度： 1-5ug/cm2以包被浓度为 2 ug/cm2为例 ：用无菌 0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到 0.012mg/ml 。
确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面 ，开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后 ，用PBS洗3-4次后直接使用 。包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间。
2、三维胶原的制备鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/mL以上 ，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶，建议成胶浓度1-2mg/mL。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06×体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。
需要的溶液（均需要无菌 、预冷）：10×PBS（可含10 mg/L的酚红用于pH指示）或10×培养液 ，0.1mol/L NaOH，0.1mol/L 乙酸(一般不用)，双蒸水A． 不含细胞的三维胶原的制备（以配制1mL ，1mg/mL三维胶为例）：将200μL鼠尾胶原蛋白I型(5mg/mL)加到置于冰浴的离心管中 ，加入 690μL H2O 。然后加到12μL 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中 ，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100μL 10×PBS或10×培养液 ，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。
原创作者：南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司
