乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(二硝基苯肼微板法)的产品介绍

阅读次数：15449 发布时间：2023/12/20 15:27:54

乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(二硝基苯肼微板法)的产品介绍

产品简介：

乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH 或 LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从一种底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物，能可逆的催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应；其反应公式：乳酸+NAD+→丙酮酸+NADH+H+，其中：L→P为正向反应；P→L 为逆向反应。乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(二硝基苯肼微板法)其检测原理是以 NAD 为受氢体，乳酸脱氢酶催化乳酸脱氢生成丙酮酸，丙酮酸与二硝基苯肼反应生成丙酮酸二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度呈正比，酶标仪检测440nm 处吸光度，通过测得的丙酮酸含量计算酶的活性，该方法的优点是：1、试剂原料容易获得；2、较为经典的方法；3、适用于手工操作。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，10 倍稀释后可以用于该试剂盒的测定，室温保存 3 天，用于 LDH 的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，室温保存 3 天，用于 LDH 的检测。

③保存样品：如果提取后的样品无法及时检测，需要放置时间较长，按下列方法操作：取 LDH 保护剂 1 支，加入 1ml 的 LDH 保护稀释液，配制成 LDH 保护工作液，-20℃避光保存；按待测样品(如血清)：LDH 保护工作液=9:1 的比例混合，4℃避光保存。

④(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 LDH 含量。

2、稀释标准品：用 LDH Assay Buffer 准确稀释丙酮酸标准(5mmol/L)至 0.5 mmol/L，按下表稀释系列标准品。

3、配制碱性显色工作液：按碱性显色液：蒸馏水=2:3 的比例混合，即为碱性显色工作液。

4、LDH 酶促：按照下表设置空白管、标准孔、对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中酶活性过高，可减少样品用量或适当稀释后再行测定。

5、LDH 测定：混匀，室温放置 5min，酶标仪 440nm 处测定各孔吸光度(记为 A 空白、A 标准、A 对照、A 测定)。

计算：LDH 活性单位的定义：以 100ml 血清，在 37℃孵育 15min，LDH 催化底物产生 1μmol 丙酮酸为一个金氏酶活力单位；根据酶活性定义，计算出样品中的 LDH 活性。

以丙酮酸浓度(μmol/L)为横坐标，以(A 标准-A 空白)吸光度之差值为纵坐标，绘制标准曲线，用(A 测定-A 对照)吸光度之差值在标准曲线上查出待测样品产生的丙酮酸浓度(μmol/L) ，按下述公式进行计算：