刚果红染色法的原理及使用方法!
刚果红染色法特指纤维素的染色法,刚果红能把纤维素染成红色复合物,对纤维二糖和葡萄糖无作用,可用此来鉴别纤维素或纤维素分解菌的分解作用,常用的刚果红染色法有两种。
原理:
刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红——纤维素的复合物便没法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
使用方法有:
方法一、先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应
在长出菌落的培养基上,覆盖质量浓度为1 mg/mI。的CR溶液,10~15 min后,倒去CR溶液,加入物质的量浓度为l mol/l的NaCI溶液,15 min后倒掉NaCl溶液,此时,产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。
(加NaCl的原因:刚果红是结合到培养基的多糖底物,但分解纤维素的细菌可以产纤维素酶,能分解这个多糖底物成为寡糖,这样刚果红就不能结合上去了,氯化钠就可以使结合不牢的刚果红洗去,这样就留下大小不一的透明圈,大的透明圈分解纤维素的能力就强)
方法二、在倒平板时就加入刚果红
配制质量浓度为10 mg/mI的CR溶液,灭菌后,按照每200 mI。培养基加入1 mI。的比例加入CR溶液,混匀后倒平板。等培养基上长出茵落后,产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。原创作者:南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司