ATP 含量检测试剂盒的正确使用！

阅读次数：15799 发布时间：2021/12/2 14:04:04

ATP 含量检测试剂盒的正确使用！
ATP酶又称为三磷酸腺苷酶，是一类能将三磷酸腺苷（ATP）催化水解为二磷酸腺苷（ADP）和磷酸根离子的酶，这是一个释放能量的反应。在大多数情况下，能量可以通过传递而被用于驱动另一个需要能量的化学反应。这一过程被所有已知的生命形式广泛利用。

ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。 HK 催化葡萄糖和 ATP 合成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADPH ，NADPH 在 340nm 有特征吸收峰，NADPH 和 ATP 含量成正比，以此反应 ATP 含量。

自备仪器和用品：紫外分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水和lv仿。

操作步骤：

一、ATP 的提取：

1、血清（浆）中 ATP 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 提取液），充分震荡，10000g，4℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入 500μL 的lv仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

2、组织中 ATP 的提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清至另一 EP 管中，加入 500μL 的lv仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

3、细胞或细菌中 ATP 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎 1min（冰浴，强度 20％或 200W，超声 2s，停 1s），10000g 4 ℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入 500μL 的lv仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）

注意事项：

1、加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。

2、提取过程严格在冰浴条件下进行。

3、当吸光值大于 1.2 或者ΔA 测定大于 1.2 时，可以将样品稀释后进行测定。若吸光值小于 0.01，则可以增加反应时间（5min 或 10min）来测定，标准品需要增加同样的反应时间。
4、本产品仅供科研实验用，不做其它用途！

原创作者：南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司