南京5357cc拉斯维加斯首页入口在细菌蛋白提取方面获得进一步突破

阅读次数：1022 发布时间：2016/8/23 17:05:27

南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物经过多年的研究，在细菌蛋白提取方面获得进一步的突破。细菌蛋白抽提试剂使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白及转染昆虫细胞的蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎，有效避免了外源蛋白的污染。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNase I和蛋白酶抑制剂混合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。
不同的蛋白质分离纯化的方法不同，但蛋白质分离纯化的操作步骤基本类似，那么如何进行细菌蛋白的提取呢？这里总结细菌蛋白的提取的实验试剂、操作步骤以及一些注意事项。

实验试剂

采用T7• Tag Affinity Purification Kit

T7•Tag抗体琼脂。B/W缓冲液：4.29mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl， 0.137mM NaCl，1%吐温-20，pH7.3 洗脱缓冲液: 0.1M柠檬酸，pH2.2. 中和缓冲液：2M Tris，pH10.4。 PEG 20000。

实验步骤

1.100ml 含重组表达质粒的菌体诱导后，离心5000g×5min，弃上清，收获菌体，用10ml预冷的B/W缓冲液重悬。

2. 重悬液于冰上超声处理，直至样品不再粘稠，4℃离心 14000g×30min，取上清液，0.45μm膜抽滤后作为样品液。

3. 将结合T7•Tag抗体的琼脂充分悬起，平衡至室温，装入层析柱中。

4. B/W缓冲液平衡后样品液过柱。

5. 10ml B/W缓冲液过柱，洗去未结合蛋白。

6. 用5ml洗脱缓冲液过柱，每次1ml，洗脱液用含150μl中和缓冲液的离心管收集，混匀后置于冰上，直接SDS-PAGE分析。

7. 将洗脱下来的蛋白放入透析袋中，双蒸水透析24hr，中间换液数次。

8. 用PEG 20000浓缩蛋白。