农残固化酶速测技术研究

阅读次数：985 发布时间：2017/1/6 16:25:09

酯酶（plant’esterase,P-E）与动物胆碱酯酶（choliniesterase,ChE）一样，酶活性可被有机磷（OP5）和氨基甲酸酯农药所抑制，植物酯酶（P—E）可以水解醋酸萘酯为萘酚和醋酸，萘酚与显色剂固蓝B盐反应生成紫红色偶氮化合物，从而完成显色反应。一旦植物酯酶活性被农药所抑制，就不能完成显色反应，表明样品中含有农药。本研究使用固化的植物酯酶代替通常使用的动物胆碱酯酶。酶来源于市售面粉，向面粉中按1：5（w／v）比例加入蒸馏水，在振荡器上振荡30min，以5000r／min离心20min，上清液经滤纸过滤、滤液作为原酶液保存在4℃冰箱（或将酶液分装后在真空冷冻干燥机上冻干成酶干粉、冰冻保存），使用前稀释至一定倍数作为酶的工作液。取聚苯乙烯微孔反应板，用移液枪向每孔中加酶工作液20μL，使其均匀涂于孔壁，室温下（或4℃冰箱）自然凉干后用无离子水冲洗3次，凉干、室温干燥避光保存。微孔内壁固定有植物酯酶的塑料板称为农药酶检测器。
采用梯度稀释法在蒸馏水中分别配制1000μg／L、100μg／L、50μg／L、10μg／L、1μg／L的系列浓度的农药标准溶液，在农药检测器上分别进行抑制试验，待反应完成后，用肉眼观察显色结果，确定可分辨出的标准溶液浓度结果证明灵敏度为10～100μg／L。称取不含农药的小白菜、苹果各2g，分别向其表面添加不同浓度农药，室温下凉干后，经20％甲醇提取后进行抑制试验，观察可分辨出的农药浓度，可得检出限为0.1～1.Omg／kg。将农药检测器、显色剂、基质等组装成农药残留检测试剂盒。
试剂盒与同类方法比较*主要的区别有三点：一是试剂盒使用的是植物酯酶代替同类方法使用的乙酰胆碱酯酶（AchE）或丁酰胆碱酯酶（BuchE），酶源广泛廉价易得：二是试剂盒使用的是固定化酶而不是同类方法使用的酶溶液，抗干扰力强；三是试剂盒使用20％甲醇作为蔬菜样品的提取溶液而不是磷酸缓冲液或水，提取效率有所提高。试剂盒只用于有机磷和氨基甲酸酯农药检测，检出结果只是反应出这两类农药的综合残毒指标。它检出的阴性样品不表示不含有其它农药或低于检测限的有机磷和／或氨基甲酸酯农药。

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