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大鼠叶酸(FA)elisa试剂盒实验条件选择

阅读次数:873    发布时间 :2017/7/24 20:25:11


大鼠叶酸(FA)elisa试剂盒简介

叶酸是一种水溶性维生素,它不存在于自然界中也无生物活性 ,但为具有生物活性的叶酸盐(folate)的前体 。叶酸盐在自然界广泛存在,动植物中都有 ,肝、肾、绿叶蔬菜、土豆 、麦麸等含量丰富。叶酸能传递一碳基团(甲基或甲酰)给脱氧尿苷酸 ,使之变为脱氧胸苷酸 ,进而合成DNA。

大鼠叶酸(FA)elisa试剂盒实验条件选择

ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:

  (1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯 、聚苯乙烯 、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管 、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应 ,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好 。

  (2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH9.09.6之间。吸附温度 ,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用41824小时。蛋白质包被的*适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.010μg/ml等)进行包被后 ,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量*少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为110μg/ml 。

  (3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

4) 酶的底物及供氢体的选择 :对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体 ,如TMBABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后 ,应加入强酸或强碱以终止反应 。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜  。底物使用液必须新鲜配制 ,尤其是H2O2在临用前加入 。

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