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阅读次数 ：983 发布时间：2017/11/14 15:09:57
DNA 拓扑异构酶I
产品描述 ：
本制品是将TopA基因(E.coli)在大肠杆菌中进行表达后，经多次纯化分离而得到的 。完整的DNA 拓扑异构酶I（DNA Topoisomerase I）全酶是一分子量97kDa的蛋白 。
DNA 拓扑异构酶I催化4种反应 ：
1. 催化负超螺旋DNA的松弛。
2. 在单链环状DNA分子内形成绳结（Knotting）和解开绳结（Unknotting）。
3. 催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子 。
4. 2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时，发生两个分子的连结反应（Catenation）或者逆反应（Decatenation）。
产品用途：
1. 催化负超螺旋松弛
2. 识别错配
3. DNA的结构转换和解析
4. 其他科研用途
保存温度：
-20℃
产品包装：
| 产品组成 | 体积 |
| DNA拓扑异构酶I（5U/ul） | 10ul |
| 10xDNA TopoI Reaction Buffer | 1ml |
质量保证：
经多次柱纯化 ，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带 ；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内 、外切酶污染。
活性定义 ：
一个单位定义为在25μl反应体系，37℃15分钟条件下 ，能催化>95% 的0.5 μg pUC19 RF I型 (负超螺旋)DNA的解旋所需要的酶量 。DNA超螺旋化通过不含EB的琼脂糖凝胶电泳来检测。
反应条件：
1x反应缓冲液[50mM KAc,20mM Tris-Ac,10mM Mg(Ac)2,100ug/ml BSA(pH7.9储存于25℃)] ，37℃温育。
热失活 ：
65℃，20分钟。
注意事项：
pUC19 RF I型DNA用DNA拓扑异构酶I处理后进行琼脂糖凝胶电泳时，如果胶中含有EB染料 ，反应前后DNA条带位置不发生改变 。这是由经过DNA 拓扑异构酶I的作用转换为松弛型的DNA受EB影响 ，再次变为超螺旋状态造成的。因此使用DNA 拓扑异构酶I作用后 ，先用不含EB染料的胶行电泳，再用EB染色 。
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