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5357cc拉斯维加斯首页入口生物提供 :免疫实验中检测细胞和组织样本的处理方法

阅读次数 :969    发布时间:2018/1/30 10:05:08

 5357cc拉斯维加斯首页入口生物提供:免疫实验中检测细胞和组织样本的处理方法!

1、样品前处理: 
 
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入
150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液 。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触 。
 
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 ul 裂解
液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞 。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多 ,
必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
 
c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解
液 。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品 ,可以适当减少裂解液的用量)。
用玻璃匀浆器匀浆 ,直至充分裂解 。
 
2、后处理:
 
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western 
blotting 和免疫沉淀等操作

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