南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物专业提供荧光定量PCR实验代测服务！

阅读次数：1112 发布时间：2018/3/26 14:03:12

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南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司提供实验室代测服务，包括放免实验代做，免疫组化，PCR，WB实验代测等到，精准的设备加上技术娴熟的实验操作人员，让您的每一份实验结果均真实可靠，欢迎来电咨询！

南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物提供 PCR实验代测，实时荧光定量PCR实验代测，RT-PCR代测。客户只需要提供样本，其他所有试剂都由本公司提供。一般7-10天出结果，提供原始数据，分析数据，实验报告，实验室所用型号，图片，动力扩增曲线等。

Real -Time PCR，即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法，它是在PCR反应体系中加入荧光物质，并通过Real -Time PCR检测系统对PCR反应进程中的荧光信号强度进行实时监测，*终对实验数据进行分析处理的方法。Real -Time PCR自1996年由美国Applied Biosesystems公司推出以来，广泛应用于生物研究的各个领域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探针法两种。

荧光定量PCR代测服实验室试剂的操作：

1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。

2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压灭菌。

3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。

4)所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。

5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。

6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。

7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

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应注意的问题及其解决方法：

1．PCR反应条件的优化
要优化特定的PCR反应，有必要试用不同的反应组分和循环参数。表2-1列出了添加或改变某一试剂浓度对反应结果的影响，从中大家可以得到一些线索以改进反应条件，提高PCR产量和/或特异性，一般情况下，只须改变一两个参数就行了，如pH值和MgCl₂浓度。表2-2给出了循环参数对PCR结果的影响。

2．引物的设计
毫无疑问，引物的碱基组成，长度及其靶序列的同源性是决定PCR成败的首要因素，选择设计引物在一定程度上仍然要靠经验，对于某一对引物而言尚无通用的规则可严

3．出现异常结果时的解决思路
在做PCR反应的过程中，由于其酶促反应的本质，影响*终结果的因素较多，所以出现一些非预料的结果是可以理解的。下面简单地总结一下在PCR反应结果出现异常时5357cc拉斯维加斯首页入口应该采取的措施。

（1）电泳检查没有 PCR产物

a．需检查一下Taq DNA聚合酶是否失活，或是活性太低，还需查一下在加样过程中是否向体系中加过Taq DNA聚合酶；

b．需检查一下所使用的引物，看其序列设计是否正确，是否碱基组成不平衡；

c．需要检查一下PCR反应过程中模板是否变性充分，尤其在前几个循环中是否变性充分；可以适当地提高模板变性的温度或是适当延长变性的时间；

d．需检查一下在PCR反应体系中是否有Taq DNA聚合酶的抑制剂，如SDS污染等等；

e．需检查一下模板中是否有蛋白酶和核酸酶的污染，可以预先加热使之失活。

荧光定量PCR代测服主要仪器及耗材：

旋涡振荡器：上海青浦泸西仪器厂产品
手握式电动匀浆机：德国FLUKO 公司产品
低温冷冻：Sigma（3K15）公司产品
Real-time检测仪：ABI （ABI-7300）公司产品
超纯水分离系统：美国LABCONCO公司
离心管及10μL、200μL、1000μL枪头等常规耗材均为国产；RNA提取过程中所需的离心管、枪头等耗材经过0.1%的DEPC水浸泡过夜，121℃灭菌30min，烘干后备用。

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