本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中羊钙激活中性蛋白酶1(CAPN1）水平 。用纯化的羊钙激活中性蛋白酶1(CAPN1）抗体包被微孔板，制成固相抗体 ，往包被单抗的微孔中依次加入钙激活中性蛋白酶1(CAPN1），再与HRP标记的钙激活中性蛋白酶1(CAPN1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色 ，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙激活中性蛋白酶1(CAPN1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值） ，通过标准曲线计算样品中羊钙激活中性蛋白酶1(CAPN1）活性浓度。
本试剂盒用于测定羊血清,血浆及相关液体样本中钙激活中性蛋白酶1(CAPN1）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支 ，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
600 U/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
300 U/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
150 U/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
75U/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
37.5U/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂 ，其余各步操作相同）、标准孔 、待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁 ，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤 ：小心揭掉封板膜 ，弃去液体，甩干 ，每孔加满洗涤液 ，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤 ：操作同5 。
9.显色 ：每孔先加入显色剂A50μl ，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀 ，37℃避光显色10分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定 ：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用 ，酶标包被板开封后如未用完 ，板条应装入密封袋中保存 。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器 ，并经常校对其准确性，以避免试验误差 。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多 ，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线 ，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5） 。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染 。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用 。
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