潮霉素干粉和液体的区别,均可用于植物细胞培养等生化研究。
潮霉素B干粉:
效价:≥950U/mg
潮霉素溶液:(100mg/ml)
可用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。
说明:蛋白质合成抑制剂,可用于植物细胞培养等生化研究。
潮霉素(Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外,由于作用模式的差异,常与G418 (Cat:G8161),Zeocin(Cat:Z8020)和Blasticidin S(Cat:B9300)联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞,且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
使用方法
1. 常用筛选浓度
注意:潮霉素用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
注意事项
1) 潮霉素的抗性基因(hyg或hph)除了来自E. Coli.之外,还发现于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2) 本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。
3) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
潮霉素干粉和液体的区别,均可用于植物细胞培养等生化研究。