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阅读次数 ：974 发布时间：2018/11/29 12:00:14
明胶酶谱法分析试剂盒：大鼠海马的双向凝胶电泳图谱分析
背景及目的
抑郁症发病机制不清。结构影像、遗传 、神经生化的研究都从不同角度阐述了抑郁症的发病机制，种种证据也显示抑郁症的发病在脑代谢层面是有其器质性基础的，但至今还无明确、统一的结论。蛋白质组学技术为抑郁症发病机制的研究提供了新的手段。本研究通过建立抑郁症的动物模型 ，利用双向电泳和质谱鉴定技术，分析海马组织差异蛋白质表达，旨在探索抑郁症新的治疗靶点，为建立客观的诊断、治疗 、停药指标提供线索 。
方法
以雄性成年SD大鼠10只，采用慢性不可预见的轻度应激（chronicunp redictable mild stress，CUMS）制作抑郁症模型。将动物予以夹尾1 min、禁水24 h、禁食24 h 、45℃环境5 min、昼夜颠倒24 h、水平振荡30 min （160次/min）、4℃冰水游泳5 min ，7种刺激每天随机采取1种 ，共安排3周。经行为学测试：蔗糖水试验和旷野试验（open - field test）评估模型后，三氯乙酸/丙酮沉淀法提取海马组织蛋白质 ，以固相pH梯度双向凝胶电泳分离蛋白质，考马斯亮蓝染色后 ，应用ImageMaster 2D软件进行图像分析。胰蛋白酶胶内消化，进行MALD I -TOF-MS质谱分析，将得到的质谱数据，去除主要干扰峰后，检索NCBI数据库，鉴定蛋白质 。
结果
10只大鼠应激后兴趣和快感明显缺乏，活动减少，模型建立成功。双向电泳图谱分辨率高 ，重复性好。抑郁组平均蛋白质点数为（1 609100 ±1510）点，正常组平均蛋白点数为（1615167 ±29178）点 ，匹配率72%。其中27个蛋白点在两组间有显著的量的改变 ，分子量集中在25~70 kD范围内 。有差异的27个蛋白点经质谱鉴定和数据库检索，发现了7个蛋白质 。分别为铁硫蛋白前体、三磷酸腺苷亚单位B、甲基丙二酸半醛脱氢酶、胰岛素样生长因子、海马胆碱神经刺激肽及两种未知蛋白。结论抑郁症发病机制可能与海马神经发生障碍和能量代谢障碍有关。差异蛋白点有可能成为抑郁症的治疗靶点
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