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阅读次数：998 发布时间：2019/11/18 14:26:26

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测定意义：

蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。

测定原理：

羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙，在370nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及：

天平、恒温水浴锅、低温、漩涡震荡仪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、无水乙醇、乙酸乙酯。

试剂组成和配制：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂0.1g×5支，4℃避光保存。（使用前根据样品数，每支加1mL水溶解，每支为10个样品用量）

试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。

试剂六：液体30mL×1瓶，4℃保存。

样品处理：

组织样品：称取约0.1g组织样品，加入1mL提取液，充分匀浆后于4℃，5000rpm离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，取上清，然后取20μL测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。

测定步骤和操作表：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至370nm，蒸馏水调零。

2、操作表

空白管

测定管

样品（μL）

试剂二（μL）

120

试剂三（μL）

120

混匀，37℃避光反应1h

试剂四（μL）

150

静置5min，4℃，12000rpm离心15min，弃上清，留沉淀

试剂五（μL）

300

漩涡混匀，4℃，12000rpm离心10min，弃上清，留沉淀

试剂五（μL）

300

漩涡混匀，4℃，12000rpm离心10min，弃上清，留沉淀

试剂五（μL）

300

漩涡混匀，4℃，12000rpm离心10min，弃上清，留沉淀

试剂六（μL）

300















































漩涡混匀，37℃温育15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000rpm离心15min，取上清200μL，微量石英比色皿/96孔板，试剂六调零，测定OD₃₇₀。

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