羊亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒抗体ELISA检测试剂盒太好用了吧
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【产品简介】
口蹄疫（FMD）又称口疮热 ，是由口蹄疫病毒引起的主要侵害偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病。在口蹄疫的免疫预防工作中 ，接种了口蹄疫疫苗后，由于多种因素可能导致羊不产生或产生低水平口蹄疫病毒抗体。
VP1蛋白是FMD病毒的主要结构性蛋白 ，构成FMD病毒颗粒的主要结构 ，是FMD的主要保护性抗原。本试剂盒采用ELISA方法检测羊血清中的特异性口蹄疫（I型）IgG抗体,适用于羊场口蹄疫病毒疫苗免疫状况的评价以及感染羊的血清学诊断 。
【用法与判定】 按以下步骤进行：
1、需要自备的器材
1.1 微量移液器；
1.2 微量移液器配套使用的枪头；
1.3 用来稀释洗涤液的500 ml量筒；
1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪；
1.5 用于稀释样品的1.5 ml Ep管 ；
1.6 蒸馏水或去离子水。
2、样品的制备
用样品稀释液将待检血清样品进行50倍稀释(建议 ：4μl血清样品加入196μl样品稀释液中)，样品加入包被板前要充分混匀，稀释不同待检样品注意更换枪头。注意 ：①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生 ；②不能稀释阴性 、阳性对照。
3、操作步骤 （﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀 ，所有试剂应平衡至室温）
3.1 在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照；
3.2 在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照；
3.3 取100μl稀释好的待检样品加入相应孔中 ，并做好记录；
3.4 37℃孵育30min ；
3.5 将各孔的液体弃入废液桶 ，每孔加250μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释）进行洗板，重复5次，每次30s；
﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果 ，尽量将孔内洗涤液抛甩干净；
3.6 每孔加100μl酶标结合物；
3.7 37℃孵育30min ；重复步骤3.5 ；
3.8 每孔加100μl底物液；
3.9 37℃孵育10min（避光显色）；
3.10 每孔加50μl的终止液 ；
3.11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值 ，即OD450值 。
4、试验有效性判断
4.1阴性对照：正常情况下 ，阴性对照孔OD450值≤0.3 ；
4.2阳性对照：正常情况下 ，阳性对照孔OD450值≥0.6；
4.3临界值(C.O.)计算 ：临界值=0.18+阴性对照均值；阴性对照OD450值大于0.2时应舍弃，如所有阴性对照OD450值均大于0.2时须重复实验；阴性对照低于0.05时以0.05计算 。
4.4结果判定 ： 检测样品OD450值≥临界值，判定该检测样品为阳性 ； 检测样品OD450值＜临界值，判定该检测样品为阴性。
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