5357cc拉斯维加斯首页入口生物告诉您如何避免RNase污染的小妙招许多实验由于RNase的污染导致了不必要的失败。然而,外源性RNase问题可以通过小心采取预防措施和谨慎应用常识来完全避免。在5357cc拉斯维加斯首页入口的经验中,*频繁出现的外源性RNase污染有两个来源。
1.被污染的缓冲液。由于粗心的无菌操作,使缓冲液被细菌或其他微生物污染。这些微生物的生长通常是肉眼不可见的,不需要等到大量繁殖就足以引起问题。因为RNase不能通过高压灭菌去除,因此被污染或怀疑被污染的溶液必须丢弃。
2.自动移液器。如果自动移液器先前用于分配含有RNase的溶液,再使用无RNase的一次性吸头就没有意义了(例如,在小规模质粒制备过程中,更糟的是进行核糖核酸酶保护性分析中)。如果自动移液器的枪管和金属枪栓接触试管壁,它就成为散RNase的非常有效的载体。对使用橡胶手套可以避免RNase问题的迷信已经在许多实验室扎根。然而事实并非如此,依赖手套并不可靠。首先,研究者的头发和胡须更容易成为罪魁祸首,更重要的是,手套只有在与皮肤表面接触前能提供有效的保护。即使每接触一次设备都更换一次手套,也未必有用,像打开冰箱、填充冰桶、填写实验记录和称量试剂。这既不明智也不好操作。戴上手套,但要不迷信它可以防止RNase。
更明智的措施包括以下几个方面:
●当处理RNA时保证自动移液器专用。
●将要用于RNA实验的玻璃器皿、塑料制品和缓冲液留出来专用。
●分成小份保存溶液和缓冲液,并将每小包装用后丢弃。避免使用已经在实验室中用于其他目的的材料和溶液。留出专门的电泳装置用于分离RNA。这些装置要用去污剂清洗,流水冲洗,乙醇冲洗干燥,之后充满3%过氧化氢,室温放置10min后,用DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。
●用无RNase的玻璃器皿、DEPC处理过的水准备所有的溶液和缓冲液,用于RNA实验的化学药品要用一次性药匙或者敲击试剂瓶的方式取用。可能的话,用0.1%的DEPC在37℃处理溶液至少1h,之后在15 psi (1.05kg/cm2 )高压灭菌15min。
●高压灭 菌的玻璃器皿和塑料制品不能有效地灭活RNase。玻璃器皿可以在300°C烘烤4h,塑料制品可以用DEPC处理,或者用商业化的产品灭活上面的RNase。
●用声誉好的厂家的无RNase一次性移液器吸头和微量离心管。为了减少污染的机会,用无菌镊子从原包装中取这些耗材放置于实验架上。
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