影响实验重复性的关键原因-5357cc拉斯维加斯首页入口生物
1试剂的新鲜度
这是决定实验结果很重要的因素。食品过期了,人吃了尚且会生病。食品的保质期在包装袋上可以找到,但对于5357cc拉斯维加斯首页入口实验用的试剂,5357cc拉斯维加斯首页入口却很少能够清楚知道保鲜期。你提取了DNA质粒用来作为PCR反应的模板,这次实验用了一部分,其余的冷冻在-20冰箱里了。下一次再进行PCR反应时,你准备融化这些DNA继续当作模板。但要知道冷冻融化的过程很可能已经破坏DNA的结构。
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两台PCR仪,设置的条件一致,*终实验结果不一定一样。尽管PCR仪都能进行PCR反应,但两台仪器可能生产厂家不一样?生产厂家一样,可能生产批次一样。温度设置是60度,一台仪器的实际温度可能是60.3度,一台仪器的实际温度可能是59.8度。尽管差距很小,但这可能就是影响你实验的重要条件。
3试剂生产厂家
很多厂家都会生产同一种药品,但由于不同厂家的质检标准不一样或者生产方式不一样,药品可能并不相同。同样是牛血清蛋白,为什么有的厂家生产的可以室温保存,有的却需要4度放置。同样的Pfu DNA聚合酶,你用这家的进行PCR反应没有结果,另一家的可能就会成功。因此,在你准备更换另一个厂家的产品的时候,一定要保证新的产品与你之前使用的尽可能相同。
4操作样品数量
引入误差*常见的因素就是一次操作样品过多。操作样品过多,很难保证所有样品处于同样的实验条件。比如,你需要提取30个质粒,即便你使用多孔道移液器也不能同时在所有EP管内同时加入P1, P2,P3。因此与其一次操作很多样品,导致实验失败,不如多花些时间,分批做,保证成功。
5其他变量
温度,浓度,体积,离心速度,离心时间等都有可能影响
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