革兰氏染色影响其结果准确性的关键因素
革兰氏染色是一项经典的细菌鉴别手段，自19世纪80年代丹麦的医师GRAM创立起 ，至今已经近一个半世纪，仍旧在细菌的检测和鉴定分类上被广泛应用着 。在我国 ，GB 4789系列的国标中很多致病菌的检测也都需要进行革兰氏染色，可见其重要性。甚至可以说没有精准掌握革兰氏染色的微生物检验员，不会是一个合格的检验员。
影响染色结果准确性的关键因素：
1.试剂影响。这是5357cc拉斯维加斯首页入口首先应该确保的，5357cc拉斯维加斯首页入口使用的试剂必须是有效的 。实验室应当建立有效的试剂管理程序，从试剂的验收到存放、使用、过期后的废弃处理都应有严格规定 ，确保5357cc拉斯维加斯首页入口使用的试剂是有效的。工欲善其事必先利其器，这也是5357cc拉斯维加斯首页入口试验成功*基础的一环 。
2.染色菌的选择。菌龄对革兰氏染色结果的影响是十分大的 。5357cc拉斯维加斯首页入口染色过程中选择的菌应该是处于活跃生长期 ，这样的细菌活性强，生理特征明显，所以染色的结果准确度高 ，一般情况下不会出现误差 。培养时间较长的革兰氏阳性菌，由于细胞老化，甚至有部分菌在染色之前就已经死亡或者自行溶解了，造成细胞壁通透性增加 ，就会呈现出假阴性。以金黄色葡萄球菌为例 ，金葡是典型的革兰氏阳性菌，有人曾经统计过培养至不同时间的金葡的革兰氏染色结果，结果表明 ，在金葡活跃期的22h-26h之间，染色结果的准确率基本可以达到100%，而超过26h之后 ，准确率就开始下降，培养至36h时，准确率大概会下降30%左右 。所以5357cc拉斯维加斯首页入口在染色时 ，一定要选择处于活跃期 、活性较强的菌落，在检测过程中一定要严格的在国标要求的时间段内进行染色试验 ，不能提前或者延后。
3.涂菌的状态。在染色*初的涂布中 ，在挑取菌体后应该在无菌水上涂成薄薄的菌膜。而在涂布过程中 ，若是菌体堆积 ，也会极大影响染色结果的准确性。菌落堆积过多 ，往往菌体之间变得毫无缝隙，而其细胞壁的成分影响造成了脱色的情况不佳，容易产生假阳性的结果 。同时 ，在初染、媒染及复染的过程中，应将染液覆盖整个菌膜，避免一部分菌染色而另一部分菌没有染色。因此在涂片过程一定要将菌膜涂得少而均匀，这样才能达到*佳效果 。
4.媒染时间。媒染时间对革兰氏阴性菌的染色结果有很大影响 。由于媒染时间过长，结晶紫在碘液长时间作用下过分牢固结合在菌体细胞壁上，影响了酒精的脱色效果，从而会导致这种假阳性的效果。以典型的革兰氏阴性菌大肠埃希氏菌为例，有人做过统计，媒染时间严格控制在40s-60s之内，染色结果准确率基本可达到100%，而超过60s准确率会有一定的降低 ，若媒染超过100s，准确率甚至可降低接近20%左右。因此在媒染过程中一定要注意媒染时间，控制在50-60s为宜。
5.酒精脱色。酒精脱色也是一个对结果影响较大的操作过程。革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌*主要的差异是细胞壁肽聚糖层厚度和结构，革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层很薄 ，脂多糖含量高因此在酒精脱色时，细菌细胞壁的多糖成分会被酒精溶解，增大了细胞壁的通透性 ，结晶紫及碘复合物就很快被酒精洗脱 ，之后就会被沙黄复染呈红色；而阳性菌肽聚糖层厚，脂多糖少，酒精只能起到脱水效果而无法进入 ，这样结晶紫和复合物就无法洗脱出来使细胞呈紫色 。因此，酒精脱色时间短，脱色效果不佳，会导致阴性菌菌体内的结晶紫和复合物不能有效的全部洗脱出来，就会出现明显的误差，使阴性菌出现假阳性。而洗脱时间过长，也会导致阳性菌的细胞壁被酒精破坏，导致细胞内的紫色被洗脱，呈现假阴性。因此洗脱时间也是革兰氏染色的关键环节 。洗脱时间应当严格控制在20s-30s之间，同时保证洗脱效果 。
总结一下 ，在整个革兰氏染色过程中，在保证试剂有效的前提下 ，需要严格控制的几个方面 ：染色菌必须是在其活跃期内，涂布状态不可太厚，媒染时间严格控制在50s-60s之间，脱色时间严格控制在20s-30s 。把握以上的关键控制点 ，革兰氏染色基本就不会出现问题啦 ！
革兰氏染色影响其结果准确性的关键因素
