α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒样本提取方法

阅读次数：989 发布时间：2020/12/30 16:30:14

α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒样本提取方法

产品说明：

淀粉水解酶，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质，在 540 nm有吸收峰；通过测定 540 nm 吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。α-AL 耐热，但是β-淀粉酶可在 70℃钝化 15min。因此粗酶液经过 70℃钝化 15min，就只有α-AL 能够催化淀粉水解。

操作步骤：

、粗酶液提取：

称取约 0.1g 样本，加 0.8 mL 蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取 15min，每隔 5min 振荡 1次，使其充分提取；6000g，室温离心 10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至 10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。

淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料，由于淀粉酶的性及性，酶退浆的退浆率高，退浆快，污染少，产品比酸法、碱法更柔软，且不损伤纤维。淀粉酶的种类很多，根据织物不同，设备组合不同，工艺流程也不同，目所用的退浆方法有浸渍法、堆置法、卷染法、连续洗等，由于淀粉酶退浆机械作用小，水的用量少，可以在低温条件下达到退浆效果，具有鲜明的环保特色。

α-淀粉酶活性计算：

1、标准曲线的绘制

以ΔA 标准为 y 轴，以标准溶液浓度为 x 轴，绘制标准曲线，得到方程 y=kx+b。将ΔA 测定带入

方程得到 x（mg/mL）。

2、α- 淀粉酶活性的计算

（1）按照样本鲜重计算

单位定义：每g 组织每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活力单位。

α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=x×V 样÷(W×V 样÷V 样总)÷T=2×x÷W

（2）按照蛋白质浓度计算

单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。

α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= x×V 样÷（V 样×Cpr）÷T=0.2×x÷Cpr

V 样：加入反应体系中样本体积，0.075 mL；V 样总：提取液总体积，10 mL； Cpr：样本蛋