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点击次数:375 发布时间:2025/2/14 11:24:56
双色SDS-PAGE蛋白加样缓冲液(5×,含DTT)是一种用于SDS-PAGE电泳的蛋白上样缓冲液,具有独特的双色设计和含有DTT的特性。以下是对该缓冲液的详细解析:
一、产品特性
双色设计:双色SDS-PAGE蛋白加样缓冲液在传统蛋白上样缓冲液的基础上加入了红色染料,形成了蓝色和红色两种颜色的混合物。这种设计使得在电泳过程中可以清晰地观察到蛋白质的迁移情况,同时红色染料还可以随蛋白质一起转移到转印膜上,用于监视转膜效率。
含有DTT:DTT(二硫苏糖醇)是一种强还原剂,能够断裂蛋白质中的二硫键,使蛋白质结构变得松散,从而消除蛋白质结构之间的差异。这有助于在电泳过程中获得更清晰的蛋白质条带。
5×浓度:该缓冲液为5倍浓缩液,使用时需要按照一定比例稀释。这种设计便于储存和运输,同时在使用时可以灵活调整缓冲液的体积。
二、使用方法
溶解与混匀:将双色SDS-PAGE蛋白加样缓冲液从冰箱中取出,室温或水浴溶解后轻轻摇匀,确保溶液混合均匀。
样品处理:将适量的蛋白质样品与缓冲液混合,通常按照一定比例进行(如每4μL蛋白质样品中加入1μL的5×缓冲液)。混合后,进行加热变性处理(如95~100℃水浴加热10分钟),使蛋白质充分变性。
上样与电泳:冷却至室温后,离心去除可能的沉淀物,取上清液进行上样。电泳过程中,注意控制电压和时间,观察蓝色和红色染料的迁移情况。当蓝色染料到达凝胶底部附近时,可以停止电泳。
转膜与监视:如果需要进行蛋白质转膜操作,可以利用红色染料随蛋白质一起转移到转印膜上的特性,监视转膜效率。
三、注意事项
储存条件:双色SDS-PAGE蛋白加样缓冲液应存放在-20℃冰箱中保存,避免反复冻融。在储存过程中,可能会出现SDS沉淀现象,使用前应在温水中溶解。
安全性:由于该缓冲液中含有DTT等化学成分,具有一定的毒性。在使用过程中应穿戴适当的防护装备(如实验服、手套等),避免直接接触和吸入。
适用性:该缓冲液适用于常规的SDS-PAGE电泳和蛋白质转膜操作。但请注意,由于含有DTT等还原剂成分,可能不适用于某些特定的实验条件或蛋白质样品。
四、产品优势
清晰的电泳条带:由于含有DTT成分,能够断裂蛋白质中的二硫键,使蛋白质结构变得松散,从而在电泳过程中获得更清晰的蛋白质条带。
便于观察与监视:双色设计使得在电泳过程中可以清晰地观察到蛋白质的迁移情况;同时红色染料还可以随蛋白质一起转移到转印膜上,用于监视转膜效率。
灵活的使用方式:5×浓度的设计便于储存和运输;同时在使用时可以灵活调整缓冲液的体积以满足不同实验需求。
更新时间:2025/3/11 6:31:05