γ-谷氨酰转肽酶试剂盒说明书
产品内容：试剂一 ：液体×1瓶，4℃保存 。
试剂二 ：粉剂×1瓶 ，4℃保存。
试剂三 ：液体×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体×1瓶 ，4℃保存。
工作液（在试剂二瓶中配制） ：临用前配制，把试剂三倒入试剂二瓶中，充分溶解（室温过低时可以40℃水浴促进溶解）；然后把试剂四倒入试剂二瓶中，混匀后室温保存。
产品说明：
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体 。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用 。γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基苯胺，在405nm有特征光吸收 ；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。
自备和用品
可见分光光度计、低温、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水
操作步骤 ：
一、粗酶液提取
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织 ，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆 。8000g，4℃离心15min，取上清 ，置冰上待测。
2. 细菌 、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w ，超声3秒 ，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心15min ，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体 ：直接测定。
二 、γ-GT 测定操作
1. 分光光度计预热 30min ，调节波长到 405 nm ，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴中预热 30min（保证无沉淀）。
3. 测定管 ：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 100μL 上清液 ，900μL 工作液 ，混匀后于 405nm 测定10 s 和 70 s 时吸光度，记为 A1 和 A2。
注意事项 ：
1. 培养细胞中γ-GT活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞（防止因为蛋白质变性导致酶失活）。
2. 配置好的工作液2周内使用完毕
γ-谷氨酰转肽酶试剂盒说明书
