猪透明质酸(HA)说明书
ELISA 是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。自上世纪70 年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域 。
ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记 。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性 ，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上 。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例 。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关 ，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析 。由于酶的催化效率很高 ，间接地
放大了免疫反应的结果 ，使测定方法达到很高的敏感度。
ELISA 试剂盒的检测目的和实验原理
1.检测目的
本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中透明质酸(HA)含量。
2.实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪透明质酸(HA)水平 。用纯化的猪透明质酸(HA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入透明质酸(HA) ，再与HRP 标记的透明质酸(HA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的透明质酸(HA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中猪透明质酸(HA)浓度 。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释 。
240ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
120ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
60ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
30ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
15ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔 、待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl ，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟 。
4. 配液 ：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液 ，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
