羟脯氨酸检测试剂盒（分光光度法）说明书
规格: 50T/48S
产品简介：
HYP 是机体胶原蛋白主要成分 ，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱 、软骨和血管等 ，因此HYP 含量是反映
胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样品经水解产生游离的HYP，进一补被氯胺T 氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，
在560nm 处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm 吸光值，可计算HYP 含量。
产品内容：
组织提取液：6mol/L 盐酸 ，自备。浓盐酸 ：H2O（V/V）= 1:1，室温保存；
细胞提取液：液体100mL×1 瓶 ，4 ℃保存；
试剂一：液体10mL×1 瓶 ，4 ℃避光保存；
试剂二 ：液体10mL×1 瓶 ，4 ℃避光保存 。
操作步骤：
一、羟脯氨酸提取 ：
1. 组织 ：取约0.5g 样品于玻璃管，加入5mL 的组提取液，置于110℃烘箱，水解6 至12 小时，16000rpm，25℃ ，
离心20min ，用提取液定容至5mL，取上清待测。
2. 细胞 ：取约500 万个细胞，加入2mL 的细胞提取液，于高压消毒器中15 磅保持30min，自然降压后待测。
二、测定操作：
对照管测定管
样本（mL） 0.2
试剂一（mL） 0.2 0.2
混匀 ，室温静置20min
试剂二（mL） 0.2 0.2
H2O（mL） 0.6 0.4
混匀，60℃ ，20min，取出后室温静置15 min，测定A560。(A560=A 测定-A 对照)
羟脯氨酸含量计算：
标准曲线 ：y=64.875x+ 0.0251，R2=0.9991
注意事项：
1 、OD 值大于0.8 ，样品适当稀释再测定 ，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。
