测定原理
GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─
谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在540nm 处有吸
收峰 ，可用分光光度计测定。
所需的和用品
可见分光光度计/酶标仪 、水浴锅 、台式、可调式移液器 、微量石英比色皿/96 孔板、
研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：10mL×1 瓶，-20℃保存。
试剂二 ：10mL×1 瓶 ，-20℃保存 。
试剂三：粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入5mL 蒸馏水充分溶解备用 ，用不完的试剂仍
-20℃保存 。
试剂四：15mL×1 瓶 ，4℃保存。
样本测定的准备
1 、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆 。8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
2 、血清（浆）样品：直接检测 。
GS 活力单位的计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）GS 活性
单位定义 ：每mL 血清（浆）在每mL 反应体系中每min 使540 下吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。
计算公式：
GS（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =19×ΔA
2、组织 、细菌或细胞GS 活性
（1）按样本蛋白浓度计算 ：
单位的定义：每mg 组织蛋白在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。GS（U prot）＝ΔA×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。GS（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =19×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1 万个细菌或细胞在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位GS（U/104 cell）＝ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =0.038×ΔAV 反总 ：反应体系总体积，0.4mL； V 样：加入样本体积 ，0.07mL ；V 样总：加入提取液体积，1 mL ；T ：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度 ，mg/mL；W ：样本质量 ，g ；500：细菌或细胞总数，500 万。
