植物原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins, OPC）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意 ：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合
物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用
于医药，食品 ，化妆品，保健品行业 。
测定原理:
在酸性条件下，植物原花青素 A 环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应 ，产生
有色化合物 ，在 500nm 处有特征吸收峰 ，测定 500nm 光吸收值，可计算植物中原花青素的
含量。
自备实验用品及:
天平 、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪 、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水、盐酸 、无
水乙醇和甲醇。
试剂组成和配制:
提取液：60%乙醇 ，自备 ，4℃保存 。（60mL 无水乙醇溶于 40mL 蒸馏水）
试剂一：8%盐酸 10mL，自备 ，4℃保存。（800μL 盐酸溶于 9.2mL 甲醇）
试剂二 ：粉剂 0.05g×1 瓶 ，4℃避光保存，临用前加 5mL 甲醇溶解。
测定工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照 1:1 混合 。
空白工作液：临用前按照用量将试剂一和甲醇按照 1:1 混合。
OPC 提取:
称取约 0.1g 样本，加入 2mL 提取液，匀浆后，60℃振荡提取 2h，
10000g，25℃ ，离心 10min，
取上清待测。
测定操作表:
1 、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 500nm ，蒸馏水调零。
2、 操作表
对照管 测定管
样本（μL） 40 40
测定工作液（μL） 160
空白工作液（μL） 160
混匀，30℃水浴 30min ，于微量石英比色皿/96 孔板中检测 500nm 处吸光值 ，ΔA=A 测定-A
对照，每个测定管设一个对照管 。
OPC 计算公式:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线 ：y=0.0194x+0.0006，R2=0.999
OPC 含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3
= 0.515×(ΔA-0.0006）÷W
V 样总：加入提取液体积，2mL ； V 反总 ：反应总体积，0.2mL ；V 样：反应中样品体积，
0.04mL；W ：样品质量，g
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0097x+0.0006，R2=0.999
OPC 含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3
= 1 03×(ΔA-0.0006）÷WV 样总：加入提取液体积，2mL； V 反总 ：反应总体积 ，0.2mL；V 样：反应中样品体积 ，
0.04mL；W ：样品质量，g
注意事项 ：
1、配制好的试剂二应尽快使用，4℃保存时间不超过一个月。
2、吸光度变化应该控制在 0.01～0.8 之间 。否则加大样品量或稀释样品 ，注意计算公式中参
与计算的稀释倍数要相应改变。
3 、检出限为 10μg/g。
